ΦΑΣΜΑΤΟΣΚΟΠΙΑ-ΦΑΣΜΑΤΟΜΕΤΡΙΑ

Στόχοι Μαθήματος

1. Γνώση των διαφορών των φασμάτων υπεριώδους, υπερύθρου και ορατού.
2. Κατανόηση του μεγίστου μήκους κύματος απορρόφησης μιας ουσίας, λmax
3. Διατύπωση και κατανόηση των συνεπειών του νόμου των Bouget-Lambert-Beer (BLB).
4. Γνώση και σχέση μεταξύ απορροφητικότητας (Α) ή οπτικής πυκνότητας (OD) και διαπερατότητας (Τ).
5. Τι εκφράζει ο συντελεστής μοριακής απορροφητικότητας, Εm, ποιές είναι οι μονάδες μέτρησης και ποιά είναι η σημασία του στη φασματοσκοπία.
6. Αποκλείσεις από τον νόμο των BLB
7. Τι είναι η καμπύλη φάσματος απορρόφησης και πως μετράται.
8. Τι είναι και πως κατασκευάζεται η πρότυπη καμπύλη απορρόφησης.
9. Κατανόηση της γενικής λειτουργίας του φωτόμετρου.
10. Πως μετράται η συγκέντρωση άγνωστης ουσίας με βάση την πρότυπη καμπύλη της.


Στοιχειώδης εισαγωγή 5 σελιδων στις αρχές της φασματοσκοπίας
http://web.mit.edu/5.33/www/lec/spec1.pdf

http://linus.chem.ku.edu/genchemlab/1902015/Introduction%20to%20Spectroscopy%20Chemistry%20185%20Fall%202012.pdf


ΥΠΟΔΕΙΓΜΑΤΙΚΕΣ ΑΣΚΗΣΕΙΣ ΚΑΙ ΠΡΟΒΛΗΜΑΤΑ

1. Να υπολογιστεί η απορροφητικότητα, Α, διαλύματος της πρωτεϊνης κυτοχρώματος C. Δίνονται: l=1 cm, c=0,5 mg/ml, Em=153000 1/M 1/cm και MB=13370 g/mol. 

2. Διαλυμα καθαρής αλβουμίνης χρησιμοποιήθηκε για την κατασκευή πρότυπης καμπύλης (με την μέθοδο προσδιορισμού της συγκέντρωσης πρωτεϊνών κατά Lowry) και έδωσε τα πιο κάτω αποτελέσματα.

BSA (Αλβουμίνη), μg/μl         0        20             40           60          80           100
A                                             0        0,05          0,10         0,15      0,20         0,23

Κατασκευάστε την πρότυπη καμπύλη.

α) Ποιά συγέντρωση έδωσε Α=0.12
β) Ποιά είναι η συγκέντρωση του διαλύματος όταν Α=0,25


ΕΡΩΤΗΣΕΙΣ ΑΝΑΣΚΟΠΗΣΗΣ

 1. Δώστε τους οριμμούς της απορροφητικότητας (Α), του φάσματος Α, της μοριακής απορροφητικότητας Εm και της διαπερτότητας.

2. Εξηγείστε γιατί η απορροφητικότητα είναι αδιάστατο μέγεθος.

3. Ποιές είναι οι διαστάσεις της Em ;

4. Σε ποιό νόμο στηρίζεται η φασματομετρία ;

ΕΡΩΤΗΣΕΙΣ ΚΡΙΣΕΩΣ

1. Παρ' όλο που η απορροφούμενη ηλεκτρομαγνητική ενέργεια των φωτονίων (hv) είναι κβαντισμένη, τα φάσματα απορρόφησης είναι συνεχή. Να εξηγήσετε γιατί.

2. Ο συντελεστής Em εκφραζεται σε L/mol/cm. Από τί εξαρτώννται οι μονάδες του Em ;

3. Ποιά είναι η Α διαλύματος ουσίας όταν l=1 cm και Em=3782 L/mol/cm ;

4. Πως η Em μιας ουσίας επηρεάζει τη ευαισθησία του φασματοφωτομέτρου ;

5. Έχετε δυο ουσίες με Em ίσο με 10000 και 20 αντίστοιχα: Ποιά είναι πιο έυκολο να ανιχνευτεί αι γιατί ;

5. Ποιά η σημασία της Em στην φασματομετρία ;