ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ ΑΙΜΑΤΟΣ

Στόχοι μαθήσεως

Τι πρέπει να γνωρίζετε:

1. Ποιές είναι οι κύριες τάξεις πρωτεϊνών του αίματος (σελ. 62).
2. Ποιές είναι οι κύριες πρωτεΐνες του πλασματος και ποιές είναι οι κύριες λειτουργίες τους (σελ 62).
3. Πως προσδιορίζοντια ποσοτικά (σελ 62).

    α) Κλασμάτωση με εξαλάτωση
    β) Κλασμάτωση με EtOH (αιθυλική αλκοόλη)
    γ) Ηλεκτροφόρηση

4. Ηλεκτροφόρηση καια ταξνόμηση (σελ. 63, Εικόνα 1).
5. Τι είναι και πως χρησιμοποιείται ο ισοηλεκτρικός εστιασμός.
6. Που παράγονται οι πρωτεΐνες του πλάσματος (σελ 63).

7. Κύριες λειτουργίες των: 

    α) Αλβουμίνης
    β) α1- και α2-σφαιρινών
    γ) γ-σφαιρινών

Σημειώσεις

ΕΞΑΛΑΤΩΣΗ

Οι πρωτεϊνες είναι πολυηλεκτρολύτες λόγω ιοντισμού των πλευρικών ομάδων R των αμινοξέων. Επομένως, τα φορτία τους και η διαμόρφωσαή τους επηρεάζεται από τις μεταβολές του pH και από την συγέντρωση αλάτων. Οι περισσότερες πρωτεΐνες παρουσιάζουν μικρότερη διαλυτότητα σε υψηλή συγκέντρωση άλατος, φαινόμενο που ονομάζεται εξαλάτωση  (salting out). Τουναντίον, εναλάτωση (salting in) είναι η βαθμιαία αύξηση της διαλυτότητας με την προσθήκη άλατος. Η συγκέντρωση του άλατος που απαιτείται για να εξαλατωθεί μια πρωτεΐνη διαφέρει από πρωτεΐνη σε πρωτεΐνη. Επομένως, η εξαλάτωση μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως μέθοδος κλασμάτωσης των πρωτεϊνών. Παραδείγματος χάριν, το ινωδογόνο, η πρωτεΐνη που προκαλεί την πήξη του αίματος, καθιζάνει με 0,8 M θειικού αμμωνίου, ενώ η λευκωματίνη του ορού χρειάζεται 2,4 M θειικού αμμωνίου. Η εξαλάτωση είναι επίσης χρήσιμη ως μέθοδος αύξησης της συγκέντρωσης πρωτεϊνών που προέρχονται από άλλα στάδια καθαρισμού και βρίσκονται σε αραιά διαλύματα. Μπορούμε επίσης να χρησιμοποιήσουμε και τη μέθοδο της διαπίδυσης προκειμένου να απομακρύνουμε το άλας από ένα διάλυμα αν αυτό είναι αναγκαίο. ∆ιαπίδυση. Οι πρωτεΐνες είναι δυνατόν να διαχωριστούν από μικρότερα μόρια με τη μέθοδο της  διαπίδυσης (dialysis) μέσα από μια ημιδιαπερατή μεμβράνη, όπως μια μεμβράνη κυτταρίνης με πόρους.Τα μόρια που έχουν διαστάσεις σημαντικά μεγαλύτερες από τη διάμετρο των πόρων διατηρούνται μέσα στον σάκο διαπίδυσης, ενώ τα μικρότερα μόρια και τα ιόντα περνούν από τους πόρους της μεμβράνης και εμφανίζονται στο διάλυμα εκτός σάκου. Η τεχνική αυτή είναι χρήσιμη για την απομάκρυνση του άλατος ή άλλων μικρών μορίων, δεν είναι αποδοτική, όμως, για τον διαχωρισμό πρωτεϊνών.

Άσκηση
 

Ανακτήστε  την πρωτοταγή δομή του ινωδογόνου και της λευκωματίνης στην PubMed/protein, και αναλύστε την σύσταση σε αμινοξέα (στο EXPASY). Πως μπορεί η σύσταση να ερμηνεύσει την διαφορετική συμπεριφορά τους  παρουσία θειϊκού αμμωνίου;

PubMed  
Στο PubMed θα ανοίξετε το παράθυρο protein και θα γράψετε το όνομα (Αγγλιστί) της κάθε πρωτείνης: Λευκωματίνη=albumin, ινωδογόνο=fibrinogen. Θα διαλέξετε την ανθρώπινη πρωτείνη με κωδικό που να ξεκινάει από NP_. Κατόπιν θα ανοίξετε την σειρά αμινοξέων FASTA και θα την αποθηκεύσετε για ανάλυση πσοσοτού αμινοξέων στην τράπεζα δεομένων EXPASY, πιο κάτω.
 
EXPASY site


Αναφορές
1) Στοιχειώδης εισαγωγή στις πρωτεΐνες.

ΠΡΩΤΕΪΝΕΣ

2) Πιο λεπτομερειακή περιγραφή διαχωρισμού των πρωτεϊνών.

Σελίδες 18-23!

ΕΙΣΑΓΩΓΗ ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΣ ΠΡΩΤΕΪΝΩΝ ΜΕ ΒΑΣΗ ΤΟ ΜΕΓΕΘΟΣ ΚΑΙ ΤΗ ΔΙΑΛΥΤΟΤΗΤΑ