ΦΑΣΜΑΤΟΣΚΟΠΙΑ

Στόχοι εργαστηρίου

Προαπαιτούμενες γνώσεις για το εργαστηριακό μέρος

1) Πως παρασκευάζουμε διαλύμματα
2) Πως αραιώνουμε διαλύμματα
3) Τι είναι προσιφώνιο, σιφώνιο, μικροσιφώνιο.

1. Εισαγωγή στην φασματομετρία

Σελίδες 10-19

2. Κατανόηση του μεγίστου μήκους κύματος απορρόφησης μιας ουσίας, λmax
3. Διατύπωση και κατανόηση των συνεπειών του νόμου των Bouget-Lambert-Beer (BLB).
4. Γνώση και σχέση μεταξύ απορροφητικότητας (Α) ή οπτικής πυκνότητας (OD) και διαπερατότητας (Τ).

5. Σπουδαιότητα του συντελεστή μοριακής απορροφητικότητας, Εm. Μονάδες μέτρησης και ποιά είναι η σημασία του στη φασματοσκοπία. Ένας άλλος, πιο χρηστικός ορισμός του Em: Είναι η απορροφητικότητα ενώσεως ανά μονάδα συγκεντρώσεως, C, και ανά μονάδα διανυθέντος μήκους της μονοχρωματικής ακτίνας (που δεν μεταβάλλεται) μέσω διαλύματος της ενώσεως. 

Συνέπεια: Όσο μεγαλύτερος είναι ο Em ενώσεως τόσο πιο πολύ απορροφά/μονάδα C και επομένως τόσο λιγότερη συγκέντρωση  χρειαζόμαστε για να την ανιχνεύσουμε.

 6. Πως υπολογίζεται ο Em. Πείραμα 1ο, σελ. 16.
7. Πως υπολογίζεται η συγκέντρωση, c, αγνώστου δείγματος.
Με 2 μεθόδους, α) Απόλυτη μέθοδος: Πρέπει να είναι γνωστές οι: Em και Α, από τον νόμο BLB. β) Συγκριτική μέθοδος: Πρότυπο διάλυμα γνωστών συγκεντρώσεων δίνει Αγ όπως και το άγνωστο διάλυμα Αα.
8. Αποκλείσεις από τον νόμο των BLB
9. Τι είναι η καμπύλη φάσματος απορρόφησης φασματος, και λmax, και πως μετράται. Πείραμα 1ο, σελίδα 16.
10. Τι είναι και πως κατασκευάζεται η πρότυπη καμπύλη απορρόφησης.
11. Κατανόηση των μερών και της λειτουργίας του φωτόμετρου.
12. Πως μετράται η συγκέντρωση άγνωστης ουσίας με βάση την πρότυπη καμπύλη της από γνωστές συγκεντρώσεις. Πείραμα 2ο σελ. 17.

Η ενέργεια ακτινοβολίας δίνεται από την εξίσωση: Ε=hv=hc/λ


Στοιχειώδης εισαγωγή 5 σελιδων στις αρχές της φασματοσκοπίας
Αρχές φασματοσκοπίας

2. Υποδειγματικές ασκήσεις

1. Να υπολογιστεί η απορροφητικότητα, Α, διαλύματος της πρωτεΐνης κυτοχρώματος C. Δίνονται: l=1 cm, c=0,5 mg/ml, Em=153000 1/M 1/cm και MB=13370 g/mol. 

2. Διαλυμα καθαρής αλβουμίνης χρησιμοποιήθηκε για την κατασκευή πρότυπης καμπύλης (με την μέθοδο προσδιορισμού της συγκέντρωσης πρωτεϊνών κατά Lowry) και έδωσε τα πιο κάτω αποτελέσματα.

BSA (Αλβουμίνη), μg/μl         0        20             40           60          80           100
A                                             0        0,05          0,10         0,15      0,20         0,23

Κατασκευάστε την πρότυπη καμπύλη.

α) Ποιά συγέντρωση έδωσε Α=0.12
β) Ποιά είναι η συγκέντρωση του διαλύματος όταν Α=0,25

  3. Ερωτήσεις ανασκόπησης

 1. Δώστε τους ορισμούς της απορροφητικότητας (Α), του φάσματος Α, της μοριακής απορροφητικότητας Εm και της διαπερατότητας.

2. Διατυπώστε τον νόμο των Bouget-Lambert-Beer και εξηγείστε με την εξίσωση των BLB γιατί η απορροφητικότητα είναι αδιάστατο μέγεθος.

3. Ποιές είναι οι διαστάσεις της Em ;

4. Σε ποιό νόμο στηρίζεται η φασματομετρία ;

5. Γιατί χρησιμοποιούμε τυφλό στις μετρήσεις της Α ;

4. Ερωτήσεις για περαιτέρω μελέτη

1. Παρ' όλο που η απορροφούμενη ηλεκτρομαγνητική ενέργεια των φωτονίων (hv) είναι κβαντισμένη, τα φάσματα απορρόφησης είναι συνεχή. Να εξηγήσετε γιατί. 

2. Ο συντελεστής Em εκφραζεται σε L/mol/cm. Από τί εξαρτώνται οι μονάδες του Em ;

3. Ποιά είναι η Α διαλύματος ουσίας όταν l=1 cm και Em=3782 L/mol/cm ;

4. Πως η Em μιας ουσίας επηρεάζει τη ευαισθησία του φασματοφωτομέτρου ;

5. Έχετε δυο ουσίες με Em ίσο με 10000 και 20 αντίστοιχα: Ποιά είναι πιο έυκολο να ανιχνευτεί αι γιατί ;

5. Ποιά η σημασία της Em στην φασματομετρία ;

5. Ερωτήσεις εργαστηριακού βιβλίου 

 Προσπαθήστε να απαντήσετε τις ερωτήσεις στην σελίδα 19